1. 用PBS稀释配置anti-CD3功能性抗体并铺板，浓度为1-5 μg/mL。根据需要选择并计算所需抗体的量。以96孔板为例，每孔加入50 μL（6孔板500 μL）。37℃ 2h或者4℃过夜（过夜包被效果比较好）。

2. 加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入200 μL（6孔板2 mL）PBS洗涤2次，去除未结合抗体。

3. 取外周血PBMC（步骤省略），也可用分选的T淋巴细胞（也可选择在细胞刺激增殖后进行分选）

4. PBS洗涤细胞1次，用含有anti-CD28（1-2 μg/mL）以及IL-2（10-50 ng/mL）的完全培养基重悬细胞，加入96孔板（或6孔板内）。（96孔板加入3×10^5细胞，6孔板加入2-5×10^6细胞）

5. 培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态。

以上CD3和CD28抗体的浓度，可根据自己的需求进行选择，如果培养时间短，希望有很强的活化作用可以适当提高浓度，反之，可降低浓度。虽然高浓度诱导活化能力强，但其诱导凋亡的作用也很明显。

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