1. 配置anti-CD3功能性抗体

用PBS稀释配置anti-CD3功能性抗体，浓度为1-5 μg/mL。根据需要选择并计算所需抗体的量。

2. 抗体铺板

用稀释后的anti-CD3功能性抗体铺板：

▪ 96孔板：每孔加入50 μL

▪ 6孔板：每孔加入500 μL

37℃ 2h或者4℃过夜（过夜包被效果比较好）。

3. 洗涤

加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入PBS（96孔板200 μL，6孔板2 mL）洗涤2次，去除未结合抗体。

4. 准备细胞

取外周血PBMC（步骤省略），也可用分选的T淋巴细胞（也可选择在细胞刺激增殖后进行分选）

5. 细胞接种

PBS洗涤细胞1次，用含有以下成分的完全培养基重悬细胞，加入培养板内：

▪ anti-CD28（1-2 μg/mL）

▪ IL-2（10-50 ng/mL）

细胞接种密度：

▪ 96孔板：每孔加入3×10⁵个细胞

▪ 6孔板：每孔加入2-5×10⁶个细胞

6. 细胞培养与观察

培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态。

说明：以上CD3和CD28抗体的浓度，可根据自己的需求进行选择，如果培养时间短，希望有很强的活化作用可以适当提高浓度，反之，可降低浓度。虽然高浓度诱导活化能力强，但其诱导凋亡的作用也很明显。