1. 用PBS稀释配置 anti-CD3 功能性抗体并铺板，浓度为 1-5 μg/mL。根据需要选择并计算所需抗体的量。以 96 孔板为例，每孔加入 50 μL（6孔板500 μL）。37℃ 2h或者 4℃ 过夜（过夜包被效果比较好）。

2. 加入细胞前吸去孔内抗体溶液，加入 200 μL（6 孔板 2 mL）PBS洗涤 2 次，去除未结合抗体。

3. 研磨小鼠脾脏，PBS洗涤细胞 1 次，离心后的沉淀弹散，加入 2 mL 红细胞裂解液(1 X)，室温裂解 5 min，用完全培养基洗涤细胞一次。

4. 用含有 anti-CD28（1-2 μg/mL）以及 IL-2（10-50 ng/mL）的完全培养基重悬细胞，加入 96 孔板（或 6 孔板内）。（ 96 孔板加入 3 × 105 细胞，6 孔板加入 2-5 × 106 细胞）

5. 培养过程中隔天换液，进行细胞计数并观察细胞状态。

*说明：以上 CD3 和 CD28 抗体的浓度，可根据自己的需求进行选择，如果培养时间短，希望有很强的活化作用可以适当提高浓度，反之，可降低浓度。虽然高浓度诱导活化能力强，但其诱导凋亡的作用也很明显。

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