二抗用来侦测或增强一抗与目标抗原结合时所生的效应。被二抗结合辨认的一抗多数是单株抗体，通常不带任何标记。相对地，二抗则几乎都是多株类型，经常为了各种实验目的，采接合上象是酶、荧光或生物素等化学接合物的方式供应。有赖于二抗扮演转换器的角色，一抗与抗原之间物理性的结合作用得以转换成发光信号并同时放大，故而使该结合作用能进一步被各类目的用途的仪器加以处理；继而多样化及深化抗体试剂的用途。

来源物种

来源物种代表我们用以产生抗体的动物物种通常我们会建议二抗和一抗必须使用不同的来源物种，例如：若使用小鼠生产的一抗，二抗就必须是辨识来自小鼠的抗体，因此抗体可产自兔子或山羊。

Citation:Janeway's Immunobiology, 9th Ed Chapter 5: The Generation of Lymphocyte Antigen Receptors

抗体分类

免疫球蛋白(抗体的学术名称，两词常可互相替换)是一异质四聚体的球形分子，系由两对藉双硫键联接的重链与轻链所构成。在胎生哺乳动物中，免疫球蛋白的重链部份根据序列可区分为IgM (μ)、IgD (δ)、IgG (γ)、IgA (α)、IgE (ε)等五种亚型，于不同的物种有时更存在「次亚型」，例如人类的的IgG有四种次亚型：IgG1 (γ1)、IgG2 (γ2)、IgG3 (γ3)与IgG4 (γ4)，小鼠的IgG有IgG1 (γ1)、IgG2a (γ2a)、IgG2b (γ2b)、IgG3 (γ3)等次亚型。轻链部份则可分为κ和λ两种亚型。除了以序列为区分的亚型，根据蛋白质的结构功能，抗体亦能区分为：抗原结合区和可结晶区两个区块。

一般而言一抗多为IgG抗体，而多株的IgG二抗通常可辨认到所有亚型的重链及轻链，故二抗使用可辨认宿主IgG抗体即可；或者也可以根据一抗的亚型使用特定亚型的二抗。例如：一抗为小鼠 IgG2a 抗体时，可使用抗小鼠IgG或抗小鼠IgG2a的二抗。

交叉吸附

因为免疫球蛋白之间的相似度较高，所以不同物种间的二抗可能会有交叉反应，针对此类的问题，可以使用交叉吸附处理过的抗体，将二抗与不同物种或不同蛋白之固定化配体树酯反应，可以降低交互反应。
在超过一种抗体同时染色以及组织染色时，交叉吸附的二抗就是一个必要的工具。

偶联物

二抗可以接合许多不同的偶联物，例如酶 (horseradish peroxidase (HRP), alkaline phosphatase (AP))、荧光 (FITC, PE, FAM, TAMRA, TRITC)或生物素，根据不同的应用选择不同的偶联物。

荧光物质：主要可以用于免疫荧光染色及流式细胞仪分析，根据仪器不同的激发光及滤片选择最适当的荧光物质，不同的荧光物质对于其激发光及散射光的波长都不同。