背景描述 | FectinMore™ 是经优化设计的针对贴壁 /悬浮细胞的非脂质体阳离子聚合物转染试剂,用于 DNA转染。 FectinMore™ 可与细胞表面的蛋白多糖结合,通过细胞吞饮作用进入细胞,形成的转染试剂-目标核酸 复合体在胞质中释放。FectinMore™ 适合贴壁细胞转染,也能转染一些难转细胞,操作简单,高效低毒。 |
储存 | -20℃,有效期两年 |
运输 | 蓝冰 |
DNA 质粒 转染细胞实验 FectinM orem推荐用量 :
培养板/皿 |
生长面积 (cm2/孔 ) |
每孔总体积 |
DNA 量 /无血清培养基 |
FectinMore™量 /无血清培养基 |
96 孔板 |
0.3 |
100 μ L |
250 ng/10 μ L |
0.75 μ L/10 μL |
24 孔板 |
2 |
500 μ L |
500 ng/25 μ L |
1.5 μ L/25 μ L |
12 孔板 |
4 |
700 μ L |
750 ng/35 μ L |
2.25 μ L/35 μ L |
6 孔板 |
9.5 |
1 m L |
1 μg/50 μ L |
3 μ L/50 μL |
60mm 培养皿 |
20 |
3 m L |
2. 5 μg/150 μ L |
7. 5 μ L/150 μL |
100mm 培养皿 |
60 |
6 m L |
5 μg/300 μ L |
15 μ L/300 μL |
操作步骤 (依据上表以 24 孔板为例 , DNA转染)
1、 准备待转染细胞:按照贴壁细胞 5×104/孔的密度接种于 24 孔板中,37 ℃培养过夜。
2、 转染前 30 分钟,将待转细胞更换新鲜无血清或有血清培养基。更换的培养基需预先平衡至室温或37℃。
3、 准备 FectinMorem/DNA 复合物:将 0. 5μg DNA 溶于 25μL 无血清培养基中混匀 ;将 1. 5 μLFectinMorem 加入另外 25 μL 无血清培养基中混匀 。室温 5 分钟后,将后者加入前者中混匀,得到的 50μL 复合物室温孵育 15 -20 分钟。
注意事项:
1) D N A 纯 度 建 议 A 2 6 0/ A 2 8 0 = 1 . 8 - 1 . 9 。
2 ) 此 处 使 用 的 培 养 基 推 荐 使 用 O p t i - M E M ™ I R e d u c e d - S e r u m M e d i u m 或 O p t i P R O ™ S F M 培 养 基 。
3 ) F e c t i n M o r e ™/ D N A 复 合 物 混 匀 操 作 需 充 分 , 勿 涡 旋 震 荡 。
4、 转染:将上述 FectinMorem/DNA 复合物加入每孔细胞(无血清或有血清细胞培养基 450 μL),复 合物占总体积 的 1/10,轻柔摇匀。37 ℃孵育 24 -48 小时。如采用无血清培养基,必要时,转染 6 小时 后可添加新鲜有血清培养基。
· 采用转染试剂转染细胞( 转染试剂:DNA=3:1) ,两天后检测蛋白表达情况 。 |
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Proteins expression checked by western blot in specific primary antibody followed by secondary antibody (anti-Mouse IgG(H+L)- HRP). |
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Proteins expression checked by FACS in specific primary antibody followed by secondary antibody (anti - Mouse IgG(H +L)- FAM). |
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Proteins expression checked by immunofluorescence (IFA) in specific primary antibody followed by secondary antibody (anti - Mouse IgG -iFluor 594). |